Mise au point et validation d’une technique de dosage du méthotrexate par chromatographie liquide haute performance

Résumé

Le méthotrexate est un anticancéreux du groupe des antimétaboliques. Son potentiel toxique et la variabilité inter et intra-individuelle de sa pharmacocinétique, rendent nécessaire l’adaptation des protocoles thérapeutiques en fonction des concentrations plasmatiques. Dans ce travail nous décrivons une technique de dosage du méthotrexate par Chromatographie Liquide à Haute Performance (HPLC) mise au point dans notre laboratoire et utilisable en routine, en recourant à une détection UV. Nous décrivons également les conditions opératoires optimisées de cette technique de dosage, dont la température et le débit d’élution, la composition et le pH de la phase mobile et les modalités d’extraction. Les procédures de validations de notre technique montrent que l’imprécision de la reproductibilité et de la répétabilité est respectivement de 3,65% et de 3%. La linéarité a été vérifiée pour les concentrations comprises entre 0,03 et 500 µmol/l avec un coefficient de corrélation de 99%. La limite de détection est de 0,02 µmol/l. Nous avons en dernier lieu comparé deux techniques de dosage du MTX : la Chromatographie Liquide à Haute Performance et la Technique Immunologique par Polarisation de Fluorescence (FPIA) La technique que nous avons mise au point est donc simple, rapide, fiable, reproductible, et surtout adaptée aux conditions techniques d’un laboratoire de pharmacologie clinique de routine.